免疫检查点抑制剂（ICI）近年来在肺癌的临床表现非常喜人。但是ICI的整体人群有效性较低。临床上如何通过biomarker筛选免疫治疗的获益人群是一个热点问题。

PD-L1表达是目前被用作ICI治疗临床较认可的biomarker。先前的研究表明，EGFR信号通路可以从本质上上调肿瘤PD-L1表达，并有助于EGFR突变的NSCLC的免疫逃逸。然而，现实世界的研究有相反的结果，PD-L1在EGFR野生型NSCLC中的表达水平较高。该案例中患者的PD-L1肿瘤比例评分（TPS）≥50％，这可能有助于他对ICI的持久响应。但是，一些PD-L1高表达的患者因免疫治疗而意外失败。相反的结果表明，PD-L1表达可能不是具有EGFR驱动基因突变的NSCLC免疫治疗可靠的预测biomarker，仍然需要新的有效biomarker。

目前TMB也被认为是ICI治疗非常有潜力的biomarker。与低TMB的患者相比，高TMB的患者对抗PD-1 / PD-L1药物的客观响应更好。同样， TNB是在转录水平或蛋白质水平诠释了这些突变，被认为是TMB的替代物。但是，一些研究表明，TNB较高的患者可能仍对ICI耐药。因此，鉴定高质量的新生抗原可以优化对肿瘤已有免疫力的预测。

我们提出了结合计算机技术和体外方法来鉴定真正的新生抗原。在大部分肿瘤细胞中表达的新生抗原被定义为主克隆新生抗原，相对而言，亚克隆新生抗原就可能是在肿瘤进化过程中产生的，其介导免疫逃逸并促进肿瘤侵袭。在这项研究中，我们在IFN-γELISPOT分析中仅检测到了T细胞对主克隆新生抗原的响应，这在一定程度上可以解释为通过Nivolumab治疗后亚克隆新生抗原丢失了。在此情况下，总共验证了4种主克隆新生抗原，包括2种来自EGFR 19del的抗原，1种来自TP53 A161T的抗原和1种来自DENND6B R398Q的抗原。尽管针对EGFR突变的免疫疗法已被广泛讨论），但尚未有研究鉴定NSCLC患者中由EGFR突变产生的新生抗原。

先前的研究表明，外周血中的记忆T细胞可对肿瘤组织中的新生抗原产生响应，新生抗原的刺激会富集CD8 ⁺ /PD-1 + 的 T细胞亚群。我们以前的研究已经确定了NSCLC患者外周血TCR是一种有用的预后biomarker。在这项研究中，我们研究了TCR频率的动态变化，发现高频T细胞克隆的维持可能与对Nivolumab的持久响应有关。通过比较新生抗原肽刺激后的每个T细胞克隆，我们鉴定了一些新生抗原特异性T细胞克隆，这些克隆可能负责识别MHC。最近的一项研究提出了免疫疗法后克隆替代的假说，研究人员发现扩展的T细胞克隆是从血液中募集的，而不是连续地存在于肿瘤中。与该假设一致，我们观察到一些重要的克隆仅在Nivolumab使用后才扩增。应该进行进一步的研究以表征这些T细胞克隆的抗肿瘤免疫力。

除肿瘤内在因素外，肿瘤微环境（TME）也将影响免疫疗法的效果。一项针对TME的研究发现，尽管EGFR驱动基因的改变在肿瘤生长中具有不可避免的作用，但其直接促成非炎症表型的产生，其调节性T细胞（Treg）渗透高而CD8 ⁺ T细胞渗透低（27）。对于我们的患者，Nivolumab是在包括EGFR-TKIs，化学疗法和放射疗法在内的多线疗法后才开始使用。因此，我们认为TME的抑制活性增强，并且我们没有对TME进行全面分析。

我们研究的临床意义是深远的。先前的一项研究表明，在EGFR 19号外显子缺失的NSCLC患者中，抗EGFR抗体的滴度最高，这表明该突变具有免疫原性并可以在蛋白质水平表达。我们可以推断，源自EGFR 19号缺失的肽序列（IPVAIKTSPK，AIKTSPKANK）可能是NSCLC癌症疫苗的潜在治疗靶标。此外，HLA-A * 11：01是亚洲人中最常见的HLA-A等位基因。EGFR 19del是NSCLC患者中EGFR突变最常见的突变，约占所有病例的45％，因此，我们的结果可以为同时有EGFR突变和HLA-A * 11：01等位基因的NSCLC患者提供重要的临床数据。